基因工程
基因工程
  重组DNA技术的基本工具
    限制性内切核酸酶（分子手术刀）
      作用
        切割DNA分子的工具，又称限制酶
      特点
        从原核生物中分离纯化得到
        能识别双链DNA分子中的特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部分的磷酸二酯键
        主要
      粘性末端
        当限制酶在它识别序列的中轴线附近的回文结构切开时，产生的时粘性末端
        不齐平
      平末端
        当限制酶在它识别的中轴线处切开时，产生的是平末端
        齐平
    DNA连接酶（分子缝合针）
      对比
        E.coli DNA连接酶
          来源：大肠杆菌
            特点：只连接粘性末端
        T4 DNA连接酶
          来源：T4噬菌体
            特点：既能连接平末端，又能连接粘性末端
      相同点
        催化形成磷酸二酯键
      不同点
        限制酶
          作用：使特定部位的磷酸二酯键断裂
            应用：提取目的基因和切割载体
        DNA连接酶
          作用：在DNA片段之间重新形成磷酸二酯键
            应用：基因表达载体的构建
    基因工程的载体（分子运输车）
      种类
        质粒，λ噬菌体的衍生物，动植物病毒
      特点
        1.能在宿主细胞内复制并稳定的保存
        2.具有多个限制酶切位点，便于目的基因插入
        3.具有标记基因，便于重组DNA的鉴定和选择
        4.必须安全，对宿主细胞无害
        稳定保存，多位点，易插入。
具有标记，便鉴定，易选泽。
安全无害
    DNA的粗提取与鉴定
      实验原理
        粗提取
          DNA不溶于酒精，某些蛋白质溶于酒精，用此方法初步分离
          DNA在不同浓度的NaCl中溶解度不同，能溶于2mol/L的氯化钠溶液
        鉴定
      方法步骤
        图（待定）
      注意事项
        沿一个方向搅拌，防止DNA断裂
        粗提取可能含有RNA、脂质、和少量蛋白质等杂质
  基因工程的基本操作程序
    基因工程的主要步骤
      目的基因的筛选与获取
      基因表达载体的构建
      将目的基因导入受体细胞
      目的基因的检测与鉴定
      主要步骤
    目的基因的筛选与获取
      筛选合适的目的基因
        根据不同的需要，目的基因的不同，它主要编码蛋白质的基因
        基因工程中利用的都是自然界中已经存在的基因
      获取目的基因的方法
        人工合成目的的基因和利用PCR特异性的快速扩增目的基因
        也可以通过构建基因文库来获取目的基因
    PCR反应
      概念
        PCR：聚合酶链式反应的缩写，对目的基因的核苷酸序列进行大量复制的技术
      原理
        DNA的半保留复制
      条件
        引物、DNA模板、耐高温的DNA聚合酶，四种脱氧核苷酸
      DNA复制与PCR反应的对比
        drawio图（待定）
      PCR反应的过程
        过程
          变性->复性->延伸->三步
        过程图（drawio图）
    基因表达载体的重建
      载体的功能
        让目的基因在受体细胞中稳定存在，并且以传给下一代。
        是目的基因能够表达和发挥作用
      基因表达载体的组成
      基因表达载体的构建方法
      与DNA相关的酶的总结
    将目的基因导入受体细胞
      植物细胞
        花粉管通道法
          细分主题 1
          细分主题 2
        农杆菌转化法
          细分主题 1
          过程图（drawio）
      动物细胞——显微注射法
        细分主题 1
        细分主题 2
        细分主题 3
        细分主题 4
      微生物细胞——Ca²⁺处理法
        细分主题 1
        细分主题 2
        细分主题 3
        细分主题 4
    目的基因的检测与鉴定
      分子水平的检测
        细分主题 1
        细分主题 2
      个体生物学水平鉴定
        细分主题 1
      目的基因的检测与鉴定方法总结
        总结图（drawio图）
    DNA片段的扩增及电泳鉴定
      基本原理
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        细分主题 2
        细分主题 3
      方法步骤
        细分主题 1
        细分主题 2
        细分主题 3
        细分主题 4
        细分主题 5
        细分主题 6
      注意事项
        细分主题 1
        细分主题 2
        细分主题 3
        细分主题 4
  基因工程的应用
    农牧业方面的应用
      转基因抗虫植物
      转基因抗病植物
      转基因抗除草剂植物
      改良植物品质
      提高动物的生长速率
      改良畜产品的品质
    医药卫生领域的应用
    食品工业方面的应用
  蛋白质工程的原理和应用
    蛋白质工程的基本原理
      对蛋白质工程概念的理解
        基础
        手段
        目的
      蛋白质工程的基本思路
        思路（文本）
          细分主题 1
        思路（流程图）
          思路图（drawio图）
    蛋白质工程与基因工程的对比分析
      对比图（drawio图）
    主要步骤
      细分主题 1
      细分主题 2
      细分主题 3
      细分主题 4
      细分主题 5